RNAzol® RT

Reagent RNAzolRT on mõeldud RNA, mRNA ning eraldi fraktsioonis ka väikeste RNA-de (10 - 200 alust) eraldamiseks erinevatest loomsetest ja taimsetest materjalidest, aga ka bakteritest ja viirustest.

RNAzol©RT, cat. no. RN190.

> Põhineb fenoolil ja guanidiin-tiotsüanaadil. Võrreldes varasemate meetoditega (2, 3) on paranenud RNA saagis ja kvaliteet.
> Eraldatud RNA ei vaja DNase töötlust hilisemate rakenduste tarvis.
> Kogu protseduur on teostatav toatemperatuuril.
> RNA eraldamine toimub ilma kloroformita.
> RNAzol©RT võimaldab uuritavast proovist paralleelselt eraldada ka DNA-d ja valku.
> 1 ml RNAzol©RT reagenti on piisav RNA eraldamiseks kuni 100 mg koeproovist või 10E7 rakust

Uuritav materjal lüüsitakse RNAzol©RT reagendi abil, misjärel lisatakse proovile ettenähtud kogus vett. DNA, valgud ja polüsahhariidid sadestatakse tsentrifuugides ning RNA jääb lahusesse. Supernatant viiakse uude tuubi, kus proovile lisatakse etanool ja sadestatakse RNA. Moodustunud sade, mis koosneb RNA molekulidest pikkusega >200 alust, pestakse kaks korda etanooliga ning elueeritakse vees või mõnes muus sobivas lahuses. Väikeste, 10-200 aluseliste RNAde (nt: tRNA; siRNA; miRNA), eraldamiseks kasutatakse RNA sadestamisel tekkinud supernatanti, millest omakorda sadestatakse isopropanooliga väikesed RNA-d. 

    Ülevaatlik protokoll:
1. Lüüsimine - 1 ml RNAzol©RT + kuni 100 mg kudet või 10E7 rakku
2. DNA/valgu sadestamine - lüüsitud proov + 0,4 ml vett, 5-15 min. möödudes 12000 g x 15 min
3. RNA sadestamine - 1 ml supernatant + 0,4 ml 75% EtOH, 5-10 min. möödudes 12000 g x 8 min
4. RNA pesemine (2 x) - 0,4 ml 75% EtOH, 4000 g x 1-3 min
5. RNA lahustamine - vees või Rormazol© lahuses (MRC, cat. no. 121)

Saadaval 50 ml, 100 ml, 200 ml ja 500 ml kogused.


Viited:
1. Chomczynski P, Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending.
2. Chomczynski P, and N. Sacchi (1987). Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal. Biochem. 162, 156-159.
3. Chomczynski P (1993). A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples. Biotechniques 15, 532-537.
  

Viimased uudised 12. oktoober - CELLdisc™ - kinnituvate rakkude massi kasvatamiseks


Innovatiivne, ergonoomilise disainiga CELLdisc™ võimaldab kasvatada eukarüootsete kinnituvate rakkude massi 1000 cm² - 1 m² pinnal.
Võrdluseks: suurima üksiku koekultuuri plaadi (145 mm) kasvupind on 143 cm², 100 mm plaadi kasvupind on 58 cm²